Immunologische Forschung in der Urologie

Die Zuordnung eines Immunogramms zu einem urologischen Patienten bedeutet, dass der behandelnde Arzt das Vorhandensein von Störungen des Immunsystems annimmt. Duplizieren bakteriell, viral, Pilzinfektionen, allergische Reaktionen, systemische Erkrankungen können die Symptome dieser Erkrankungen sein, die durch eine Reihe von Syndromen (Infektion, Krebs, Allergie, Autoimmun, lymphoproliferative) gekennzeichnet ist. Ein Patient kann mehrere Syndrome haben. Zum Beispiel können chronische Infektionskrankheiten (infektiöses Syndrom) verursachen Immunschwäche und Immunschwäche kann Prädisposition für Infektionskrankheiten und Krebs (Krebs-Syndrom) manifestiert. Infektanfälligkeit gegen einen Hintergrund von sekundärer Immundefizienz auftreten kann, die aufgrund lymphoproliferative Erkrankungen, wie Leukämie entwickelt. Es gibt drei Hauptgruppen von pathologischen Veränderungen im Immunsystem:

• die quantitative oder funktionelle Insuffizienz der einen oder anderen Verbindung der Immunität, die zur Entwicklung eines Immunschwächezustandes führt;
• eine Verletzung bei der Erkennung des Antigens durch das Immunsystem, die zur Entwicklung von Autoimmunprozessen führt;
• hyperreaktive oder "perverse" Immunantwort, die sich in der Entwicklung von allergischen Erkrankungen manifestiert.

Es gibt Screening (Tests der Stufe 1) und Qualifizierung (Tests der 2-Level) Methoden der Immundiagnostik. Die ersten existieren, um Verstöße im Immunsystem zu beheben, die letzteren - um die Mechanismen zu bestimmen, die bei ihrer Implementierung für den Zweck der weiteren Immunokorrektur beteiligt sind.

B-Zelluläre Verbindung der Immunität

Screening-Methoden

• Bestimmung der relativen und absoluten Anzahl von B-Lymphozyten mittels Immunofluoreszenz oder Cytometry monoklonalen Antikörper gegen B-Zell-Antigene (CD19, CD20, wobei CD - cluster of differentiation) Strömungs verwenden. Der B-Lymphozytengehalt ist bei Erwachsenen normal: 8-19% der Gesamtzahl der Leukozyten oder 190-380 Zellen / μl. Ein Anstieg der B-Lymphozytenspiegel tritt bei akuten und chronischen Bakterien- und Pilzinfektionen, chronischen Lebererkrankungen, systemischen Bindegewebserkrankungen, chronischer lymphatischer Leukämie, Myelom auf.
• Bestimmung der Konzentration von Immunglobulinen nespespetsificheskih (F, M, G, E) durch Einzelradialimmundiffusion, Nephelometrie oder turbometrii, Radioimmunoassay oder Enzymimmunoassay (EIA). Normen für Erwachsene: Immunglobulin (Ig) A 0,9-4,5 g / l. IgM 03-3,7 g / l. IgG 8,0-17 g / l. Eine Zunahme der Immunglobulinkonzentration tritt bei den gleichen pathologischen Bedingungen auf, bei denen eine Zunahme des Gehalts an B-Lymphozyten auftritt. Reduzieren der Konzentration von Immunglobulinen ist bei angeborenen Hypogammaglobulinämie, Tumoren des Immunsystems, Entfernung der Milz, Proteinverlust, bei Erkrankungen der Nieren oder Darm, Behandlung mit Zytostatika und immunodepreesantami.

Methoden angeben

• Bestimmung von zirkulierenden Immunkomplexen im Blut durch selektive Fällung in Polysilenglykol gefolgt von spektrophotometrischer Dichteprüfung (normal 80-20 UE). Die Erhöhung der zirkulierenden Immunkomplexe ist charakteristisch für akute bakterielle, pilzliche, virale Infektionen, Autoimmun-, Immunkomplexerkrankungen, Serumkrankheit, allergische Reaktionen vom Typ 3;
• Bestimmung von spezifischen Immunglobulinen im Blut in Bezug auf bakterielle und virale Antigene, Desoxyribonukleinsäure (DNA) in Autoimmunerkrankungen, die Identifizierung von Spermien (Autoimmun- Infertilität) und protivopochechnyh Antikörpern (Pyelonephritis und Glomerulonephritis) durch radiale Immunodiffusion oder ELISA.
• Bestimmung von Antisperm-Antikörpern im Sperma [MAR-Test (gemischte Antiglobulin-Reaktion)], die Norm ist negativ.
• Bestimmung der Konzentration von Immunglobulinen im Urin zur Differentialdiagnose zwischen Pyelonephritis und Glomerulonephritis (Selektivität der Proteinurie).
• Bestimmung von IgE im Prostatasaft zur Diagnose von allergischer Prostatitis durch radiale Immundiffusion oder ELISA. 
• Forschung in Reaktion blasttransformation Reaktion von Lymphozyten B auf einer B-Zell-Mitogen, wobei der Standardwert von 95-100% (Mitogen zur Stimulation der blasttransformation Reaktion von B-Lymphozyten in der Gegenwart von T-Lymphozyten der Kermesbeere).

T-Zell-Verbindung der Immunität

Screening-Methoden

• Bestimmung der relativen und absoluten Anzahl an reifen CD3 T-Lymphozyten-Reaktion durch Immunofluoreszenz oder Durchflusszytofluorometrie unter Verwendung anti-SDZ monoklonalen Antikörpern. Die Norm für Erwachsene ist 58-76% oder 1100-1700 Zellen / μl. Die Verringerung der Anzahl der T-Lymphozyten ist ein Indikator für die Unzulänglichkeit der zellulären Verbindung der Immunität. Dies ist charakteristisch für mehrere sekundären und primäre Immunschwächen (chronischer bakterieller und viraler Infektionen: Tuberkulose, erworbenen Immundefizienz-Syndrom, Krebs, chronisches Nierenversagen, Trauma, Stress, Alterung, Unterernährung, Behandlung mit zytotoxischen Arzneimitteln, ionisierende Strahlung). Eine Erhöhung der Anzahl von T-Lymphozyten ist vor dem Hintergrund der Immun Hyperaktivität oder lymphoproliferativen Erkrankungen. Bei Entzündung nimmt die Anzahl der T-Lymphozyten zuerst zu und dann ab. Das Fehlen einer Abnahme der T-Lymphozyten deutet auf eine Chronifizierung des Entzündungsprozesses hin.
• Beurteilung der Subpopulationen von Lymphozyten.
  • Bestimmung der Anzahl der T-Helfer (Anti-CD4-Antikörper). Normalerweise 36-55% oder 400-1100 Zellen / μl. Eine Zunahme der Anzahl dieser Zellen tritt bei Autoimmunkrankheiten, Waldenström-Krankheit, Aktivierung der Antigraftimplantation auf; Verringerung der Anzahl von T-Helferzellen tritt bei chronischen bakteriellen, viralen, protozoalen Infektionen, Tuberkulose, Acquired Immune Deficiency Syndrome, Malignitäten, Verbrennungen, Trauma, Fehlernährung, Alter, Zytostatika Behandlung, ionisierende Strahlung.
  • Bestimmung der Anzahl der T-Suppressoren (Anti-CD4-Antikörper). Normalerweise 17-37% oder 300-700 Zellen / μl. Eine Zunahme der Anzahl der T-Suppressoren tritt unter den gleichen Bedingungen auf, in denen die Anzahl der T-Helfer abnimmt und unter denselben Bedingungen abnimmt, wenn der Gehalt an T-Helfern ansteigt.
  • Der immunregulatorische Index CD4 / CD8, in der Norm 1,5-2,5. Hyperaktivität bei Raten von mehr als 2,5 (allergische und Autoimmunerkrankungen); Hypoaktivität - weniger als 1,0 (Prädisposition für chronische Infektionen). Zu Beginn des Entzündungsprozesses steigt der Immunregulationsindex an und wenn er abklingt, normalisiert er sich.

Methoden angeben

• Bestimmung der Anzahl der natürlichen Killer (NK-Zellen) - Anti-CD16 und Anti-CD56-Antikörper. Die Norm für CD 16-Lymphozyten ist 6-26%, CD56 9-19%. Eine Erhöhung der Anzahl von NK-Zellen erfolgt in Transplantatabstoßung, verringern - bei viralen Infektionen, Krebs, primären und sekundären Immunschwächen, Verbrennungen, Trauma und Stress, Behandlung mit Zytostatika und ionisierender Strahlung. 
• Bestimmung der Anzahl von T-Lymphozyten mit einem Rezeptor für Interleukin-2 (Aktivierungsmarker) - Anti-CD25-Antikörper. Die Norm ist 10-15%. Eine Zunahme ihrer Anzahl wird bei allergischen Erkrankungen, Transplantatabstoßung, Antwort auf Thymus-abhängige Antigene in der akuten Periode der Primärinfektion, Abnahme der gleichen Krankheiten, bei denen die Anzahl der NK-Zellen abnimmt, beobachtet.
• Untersuchung der Expression des Aktivierungsmarkers - des Histokompatibilitätsmoleküls der Klasse II HLA-DR. Erhöhte Expression tritt bei entzündlichen Prozessen auf, bei Patienten mit Hepatitis C, Zöliakie, Syphilis, akuten Atemwegsinfektionen.
• Bewertung der Apoptose von Lymphozyten. Ein Hinweis auf die Bereitschaft der Lymphozyten-Apoptose kann durch ihre Expression von Oberflächen-Fas-Rezeptors (CD95) in Mitochondrien und bd-2-Protoonkogen, identifiziert werden. Apoptose wurde durch Lymphozyten-Verarbeitung von zwei Fluoreszenzfarbstoffen bewertet: Propidiumiodid, die zu den DNA-Fragmenten und Annexin Y bindet, die Bindung an Phosphatidylserin an der Zellmembran in frühen Apoptose erscheinen. Die Auswertung der Ergebnisse erfolgt an einem Durchflußzytofluorimeter. Die Berechnung der Ergebnisse basiert auf dem Verhältnis der mit verschiedenen Farbstoffen gefärbten Zellen. Ungefärbte Zellen sind lebende Zellen, assoziiert nur mit dem Annexin der Y, - frühe Anzeichen von Apoptose, mit Propidiumiodid und Annexin I - Spätmanifestationen der Apoptose, Färbung nur Propidiumiodid zeigt Nekrose.
• Bewertung der Proliferation von T-Lymphozyten in vitro.
  • Die Veränderung der Zellblastogenese ist eine Reaktion der Blastentransformation von Lymphozyten. Leukozyten werden mit irgendeinem Mitogen pflanzlichen Ursprungs (Lectine) inkubiert. 72 Stunden häufiger verwendet Phytohemagglutinin, dann machen Sie einen Abstrich, Fleck es und zählen Sie die Anzahl der Blasten! Der Stimulationsindex ist das Verhältnis des prozentualen Anteils transformierter Zellen im Experiment (Kultur mit Phytohämagglutinin) zum prozentualen Anteil transformierter Zellen in der Kontrolle (Kultur ohne Phytohämagglutinin). Die Reaktion der Blasten-Transformation von Lymphozyten kann durch Einschluss einer radioaktiven Markierung (ZN-Thymdin) in kultivierten Zellen beurteilt werden, da die DNA-Synthese zunimmt, wenn Zellen geteilt werden. Störungen der proliferativen Antwort treten sowohl bei primären als auch sekundären Immundefekten auf, die mit Infektionen, onkologischen Erkrankungen, Niereninsuffizienz und chirurgischen Eingriffen verbunden sind.
  • Auswertung dieser Studien wurde die Expression von Aktivierungsmarkern (CD25, Transferrin-Rezeptor - CD71) Moleküle und der MHC-Klasse II-HLA-DR, die auf ruhenden T-Lymphozyten im wesentlichen nicht vorhanden sind. T-Lymphozyten mit Phytohämagglutinin stimulierten nach 3 Tagen Expression Aktivierungsmarker durch direkte oder indirekte Immunofluoreszenz analysiert wurden, Cytometry monoklonale Antikörper sezernierten Rezeptoren unter Verwendung fließen.
  • Messen der Menge der Mediatoren von aktivierten T-Lymphozyten [Interleukin (IL) 2, IL-4, IL-5, IL-6, Gamma-Interferon, etc.], durch Radioimmunoassay oder ELISA synthetisiert. Besonders wichtig ist die Bewertung der Konzentration von y-Interferon und IL-4 als Marker von TH und Th2 im Überstand von aktivierten Kulturen und innerhalb der Zelle. Wenn es möglich ist, ist es nützlich, die Expression des Gens für das entsprechende Cytokin durch das Niveau der Matrix-Ribonucleinsäure in der produzierenden Zelle und die Intensität der Expression der Rezeptoren für die entsprechenden Cytokine zu bestimmen.
    
• Die Reaktion der Hemmung der Wanderung der Lymphozyten. Sensibilisierte T-Lymphozyten in der Reaktion mit den Antigenfreisetzungs-Lymphokinen, einschließlich Faktoren. Hemmung der Migration von Lymphozyten. Das Phänomen der Hemmung wird beobachtet, wenn Mitogene in die Zellkultur eingeführt werden. Die Bewertung des Ausmaßes der Hemmung ermöglicht es, die Fähigkeit von Lymphozyten zur Freisetzung von Zytokinen zu beurteilen. Normalerweise beträgt die Häufigkeit der Migration 20-80%, abhängig vom spezifischen Mitogen.
• Bewertung der Zytotoxizität von NK-Zellen. Bestimmen Sie die Fähigkeit natürlicher Killerzellen, Zielzellen der Erythromyeloidlinie K-562 abzutöten. Wenn Antikörper-abhängige Cytotoxizität bewertet wird, werden mit IgG-Antikörpern beschichtete Targetzellen verwendet. Zielzellen werden mit 3H-Uridin markiert und mit Effektorzellen inkubiert. Der Tod von Zielzellen wird aus der Freisetzung der radioaktiven Markierung in die Lösung abgeschätzt. Die Reduktion der Zytotoxizität tritt bei malignen Neoplasmen auf. In einigen Fällen, wenn eine Prognose der Wirksamkeit der Behandlung mit Interleukinen erforderlich ist, wird die Zytotoxizität von NK-Zellen ausgewertet, wenn mit bestimmten Zytokinen inkubiert wird.

Untersuchung der Funktion von Phagozyten

Screening-Methoden

Untersuchung der Absorption von Mikrobenzellen durch Phagozyten (Phagozytose von Latexpartikeln, Testkultur von Staphylococcus, Escherichia coli oder aus dem Patienten isolierten Mikroorganismen). Durch Zentrifugieren des heparinisierten Blutes wird eine Suspension von Leukozyten isoliert, Serum der IV-Blutgruppe wird zur Opsonisierung hinzugefügt (Opsonine sind Proteine, die die Phagozytose verstärken). Die Mikroben-Suspension wird verdünnt, mit Leukozyten gemischt und für 120 min inkubiert, Probennahme für die Analyse nach 30 Minuten 120 Minuten nach Beginn der Inkubation. Aus den ausgewählten Leukozytensuspensionen entstehen Abstriche. Bestimme die folgenden Indikatoren der Phagozytose:

• Phagozytose-Index - der Prozentsatz an Zellen, die nach 30 Minuten und 120 Minuten Inkubation in die Phagozytose eingetreten sind; normativer Wert des Phagozytenindex (30) 94% des Phagozytenindex (120) - 92%;
• Phagozytenzahl - die durchschnittliche Anzahl von Bakterien, die intrazellulär sind; der normative Wert der Phagozytenzahl (30) 11%, Phagozytenzahl (120) - 9,8%;  
• Koeffizient der phagozytischen Zahl - Verhältnis von phagozytischer Zahl (30) zu phagozytischer Zahl (120); normal 1,16;
• der bakterizide Index der Neutrophilen ist das Verhältnis der Anzahl der in den Phagozyten abgetöteten Mikroben zur Gesamtzahl der aufgenommenen Mikroben; in der Norm von 66%.

Methoden angeben

• Die Untersuchung der bakteriziden Aktivität von Phagozyten im Test mit Nitrosine Tetrazolium (NST) ist der NST-Test. Zu den Leukozyten wird Farbstoff Lachgas Tetrazolium in gelb hinzugefügt. Wenn der Farbstoff von dem Neutrophilen absorbiert wird, findet der Reduktionsprozeß unter Einwirkung freier Radikale von Sauerstoff statt, was zu einer blauen Färbung führt. Die Reaktion wird in einer 96-Mulden-Flachbodenplatte durchgeführt. In den ersten drei Vertiefungen mit einer Mischung aus HCT und Leukozyten wird Hanks-Lösung (spontane HCT) hinzugefügt, in letzterer - Latexpartikel; inkubiere bei 37 ° C für 25 Minuten. Die Ergebnisse werden bei 540 nm auf dem Lesegerät gelesen und in herkömmlichen Einheiten ausgedrückt. Berechnen Sie den Stimulationsfaktor (K _st ), der gleich dem Verhältnis der optischen Dichte in den stimulierten Vertiefungen zur mittleren optischen Dichte in den Vertiefungen ohne Stimulation ist. Bei gesunden Menschen ist _{HCT spont} = 90 ± 45 UE, NST _Stim = 140 ± 60 UE. K _v = 1,78 ± 0,36.
• Untersuchung von Adhäsionsmolekülen. Mit Hilfe der Durchflußcytofluorimetrie wird die Expression von Oberflächenantigenen CD11a / CD18, CD11b / CD18, CD11c / CD18 bestimmt. Immundefekte mit Verletzung der Adhäsion manifestieren sich durch rezidivierende Infektionen, langsame Wundheilung und Abwesenheit von Eiter in den Infektionsherden.

Untersuchung des Komplementsystems

Screening-Methoden

Bestimmung der hämolytischen Aktivität des Komplements - eine Untersuchung des klassischen Weges der Komplementaktivierung. Verschiedene Verdünnungen des Serums des Patienten und eines gesunden Menschen werden den Erythrozyten eines mit Antikörpern beschichteten Schafs zugesetzt. Eine Einheit der hämolytischen Aktivität wird als das Inverse der Verdünnung des Serums angenommen, in der 50% der Erythrozyten zerstört sind. Der Hämolysegrad wird photometrisch durch die Ausbeute an Hämoglobin in der Lösung bewertet. Bei systemischem Lupus erythematodes mit Nierenbeteiligung, akuter Glomerulonephritis, wird eine Verringerung der hämolytischen Aktivität von Komplement beobachtet. Kombinierte Immundefekte, Myasthenia gravis, Virushepatitis, Lymphome, Zunahme - mit obstruktiven Gelbsucht, Thyreoiditis Hashimoto. Rheuma, rheumatoide Arthritis, noduläre Periarteritis. Dermatomyositis, Myokardinfarkt, Colitis ulcerosa, Reiter-Syndrom, Gicht.

Methoden angeben

• Bestimmung von Komplementkomponenten. Die quantitative Bestimmung erfolgt nach der Methode der radialen Immundiffusion und Nephelometrie.
  Die Studie ist nicht informativ, außer die antigenen Eigenschaften von Komplementkomponenten sind verändert.
• Es wurde gefunden, dass die Clq-Komponente von Komplement die Phagozytose verstärkt und zelluläre Cytotoxizität vermittelt. Seine Abnahme tritt bei Erkrankungen von Immunkomplexen, systemischem Lupus erythematodes, eitrigen Infektionen und Tumoren auf.
• Die C3-Komponente ist an der Aktivierung des klassischen und alternativen Komplementweges beteiligt. Die Verringerung seiner Konzentration ist mit chronischen bakteriellen und Pilzinfektionen, dem Vorhandensein von zirkulierenden oder Gewebe-Immunkomplexen verbunden.
• Die C4-Komponente ist an der Aktivierung des klassischen Weges beteiligt. Die Verringerung seiner Konzentration ist mit einer verlängerten Aktivierung des Komplements mit Immunkomplexen und einer Abnahme der Konzentration des C1-Inhibitors verbunden, der die Aktivierung des klassischen Komplementweges steuert. C4-Mangel tritt bei systemischem Lupus erythematodes auf, ein Anstieg von C4 tritt bei Nierenerkrankung, Transplantatabstoßung, akuter Entzündung und Erkrankungen des Gastrointestinaltraktes auf.
• C5a ist ein kleines Fragment des C5-Moleküls, das infolge der Aktivierung des Komplementsystems abgespalten wird. Die Erhöhung der Konzentration erfolgt bei Entzündungen, Sepsis, atopischen und allergischen Erkrankungen.
• Cl-Inhibitor ist ein multifunktionaler Faktor. Es steuert die Aktivierung der C1-Komponente des Komplements, hemmt die Aktivität von Kallikrein, Plasmin und aktiviertem Faktor Hageman, Proteasen Cls und Or. Ein C1-Inhibitor-Mangel führt zu einem Angioödem.
• ergänzende Studien. Zu dem Standardserum, das keine Komplementkomponente enthält, wird das Testserum zugegeben und die hämolytische Aktivität des Komplements bestimmt. Wenn die hämolytische Aktivität nicht normal wiederhergestellt wird, wird angenommen, dass die Aktivität dieser Komplementkomponente im Testserum verringert ist.

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