Immunophänotypisierung von Hämoblastosen

Deutliche Fortschritte bei hämatologischen Untersuchungen im Zusammenhang in den letzten Jahren mit dem Einsatz moderner immunologischer Methoden und automatisierte Werkzeuge für die Analyse und Zellen von peripherem Blut und Knochenmark Sortierung - Durchflusszytometer. Traditionelle morphologische und cytochemischer Studie des Substrats Zellkrankheit (Blut, rotes Knochenmark, Lymphknoten, Milz, etc.), in vielen Fällen, insbesondere bei lymphoproliferativen Erkrankungen, zeigen nicht die ganze Vielzahl von Optionen unter morphologisch ähnliche Formen und identifizieren den Ursprung des pathologischen Klon . Diese Probleme können nur durch Untersuchung der immunologischen Eigenschaften von Zellen gelöst werden. Jede Stufe der Differenzierung von hämatopoetischen Zellen hat seinen eigenen Satz von Antigenen, die auf der internationalen Klassifikation sind die Differenzierung und Differenzierung bekannt sind in Cluster aufgeteilt, bezeichnet als CD.

Bei Block Differenzierung von neoplastischen Veränderungen können in jedem Stadium der normalen Zellentwicklung auftreten, was zu einer pathologischen Zellklon definierte Substrat Krankheit ist und die gleiche immunologisch (oder phänotypische) charakteristisch. Nach einem Studium dieses Markers in Zellen kann durch eine beliebige Form oder Ausführungsform der Krankheit bestimmt wird, sind konsistent, das heißt auf der Basis von immunologischer Zellphänotyp Differentialdiagnose, die am schwierigsten in lymphoproliferative Erkrankungen sind, weil die Hauptzellsubstrat pathologischen Erkrankungen morphologisch fast die gleiche Art von Zellen sind.

Phänotypisierung ermöglicht die Typisierung von Blasten und reifen Blutzellen der Myelo-, Mono- und Lymphozyten-Reihe mit Hilfe von monoklonalen Antikörpern durch das Vorhandensein von Differenzierungsantigenen (Rezeptoren) in der Zellwand. Im Abschnitt "Bewertung des Immunstatus des Organismus" werden die Eigenschaften und diagnostische Bedeutung von Zellmarkern teilweise beschrieben; Im Folgenden finden Sie eine kurze Beschreibung der antigene Zellmarker für die Diagnose von Hämoblastose. Auf den Membranen von Blutzellen und rotem Knochenmark können die folgenden Antigene (Marker) identifiziert werden.

• CD2 ist ein monomeres Transmembran-Glycoprotein. Es ist auf der Oberfläche aller zirkulierenden T-Lymphozyten und einiger NK-Lymphozyten vorhanden. CD2 beteiligt sich an dem Prozess der alternativen Aktivierung von T-Lymphozyten. Der Nachweis von CD2 unter Verwendung von monoklonalen Antikörpern in der klinischen Praxis wird zur Phänotypisierung von akuten T-Zell-Leukämien, Lymphomen, chronisch entzündlichen und immundefizienten Zuständen verwendet.
• CD3 - ein Proteinkomplex, der mit einem Antigen-spezifischen T-Zell-Rezeptor assoziiert ist, ist der Hauptfunktionsmarker von T-Lymphozyten. Es erleichtert den Transfer des Aktivierungssignals von der Membran zum Zytoplasma der Zelle. Der CD3-Nachweis ist indiziert für die Diagnose von akuter T-Zell-Leukämie, Lymphom (CD3 wird nicht in nicht-T-Zell-lymphoiden Tumoren exprimiert) und Immundefizienz-Erkrankungen.
• CD4 - Transmembran-Glycoprotein mit einer Untergruppe von T-Helfer (Induktoren), die 45% der peripheren Blutlymphozyten exprimiert. In den frühen Stadien der Lymphozytenentwicklung im Thymus, CD4-Antigene sowie von CD8, ausgedrückt all kortikalen Lymphozyten. Medulläre Thymozyten, die den Phänotyp von reifer CD4 ähnlich + peripheren Blut-T-Zellen (Helfer-T-Zellen), entweder bereits CD4 oder CD8-Rezeptoren exprimieren. Im peripheren Blut werden bis zu 5% der Zellen gleichzeitig mit CD4 und CD8 markiert. Eine leichte Expression von CD4 ist bei einigen Monozyten möglich. CD4 wird in den meisten Fällen, T-Zell-Lymphom, einschließlich Mycosis fungoides und in HTLV-assoziierte T-Zell-Leukämie (- human T-lymphotrop Virus - Human T-lymphotrop Virus HTLV) ausgedrückt.
• CD5 - ein einkettiges Glykoprotein, das auf allen reifen T-Lymphozyten und den meisten Thymozyten vorhanden ist, wird schwach von B-Lymphozyten exprimiert. CD5 wird auf neoplastischen Zellen von B-Zell chronischer lymphatischer Leukämie und zentrocytischem Lymphom nachgewiesen. Bei anderen Formen maligner lymphatischer Erkrankungen - follikuläres Lymphom, Haarzellenleukämie, großzelliges Lymphom - wird CD5 nicht exprimiert.
• CD7 ist ein einzelsträngiges Protein, der früheste Marker der T-Zell-Differenzierung. Es wird von Pro-T-Lymphozyten exprimiert, noch bevor sie zum Thymus wandern. CD7 wird auf den meisten NK-Zellen nachgewiesen, schwache Expression wird auf Monozyten festgestellt. B-Lymphozyten und Granulozyten enthalten dieses Antigen nicht. Die Definition von CD7 wird für die Diagnose von Lymphomen, kindlicher T-Zell-lymphoblastischer Leukämie verwendet.
• CD8 ist ein Protein, das aus zwei durch Disulfidbrücken verknüpften Polypeptidketten besteht. Es wird durch eine Subpopulation von zytotoxischen und Suppressor-T-Lymphozyten exprimiert, die 20 bis 35% periphere Blutlymphozyten umfassen. Dieses Antigen weist auch NK-Lymphozyten, kortikale Thymozyten, 30% medulläre Thymozyten und eine Subpopulation roter Knochenmarkszellen auf. CD8 wird zur quantitativen Bestimmung des T-Suppressorgehalts untersucht (siehe Abschnitt "T-Lymphozyten-Suppressoren im Blut").

• CD10 ist die Endopeptidase, die mit der Zellmembran assoziiert ist. CD10 exprimiert junge Formen von B-Lymphozyten und eine Subpopulation von kortikalen Lymphozyten. CD10 exprimiert alle Zellen von ALLEN.
• CD11c exprimieren Makrophagen, Monozyten, Granulozyten, NK-Zellen und Haarzellen-Leukämiezellen auf der Zellmembran.
• CD13 ist ein Glykoprotein, das von myelomonozytischen Zellen (Progenitorzellen, Neutrophilen, Basophilen, Eosinophilen, Monozyten und myeloischen Leukämiezellen) exprimiert wird. Es fehlt in T- und B-Lymphozyten, Erythrozyten und Thrombozyten.
• CD14 ist ein Oberflächenmembran-Glycoprotein. Es wird hauptsächlich von Monozyten und Makrophagen exprimiert. CD14 wird in mehr als 95% Monozyten von peripherem Blut und Knochenmark nachgewiesen. Eine starke Expression von CD14 wird bei akuter myeloblastischer Leukämie beobachtet. Bei akuter und chronischer lymphatischer Leukämie wird dieses Antigen nicht exprimiert.
• CD15 ist ein Oligosaccharid. Er beteiligt sich an den Prozessen der Phagozytose und Chemotaxis. Dieses Antigen ist auf der Oberfläche von reifen Granulozyten und Beresovsky-Sternberg-Zellen vorhanden. CD15-Antigen-Expression wird bei Morbus Hodgkin nachgewiesen. Bei Non-Hodgkin-Lymphomen wird CD15 in den meisten Fällen nicht nachgewiesen.
• CD16 wird auf der Oberfläche von Granulozyten, Monozyten, Makrophagen und NK-Zellen exprimiert. Alle dieses Antigen exprimierenden Lymphozyten besitzen die Fähigkeit zur antikörperabhängigen zellulären Zytotoxizität. CD16 wird bestimmt, wenn chronische myelozytische Leukämien typisiert werden, um NK-Zellen zu charakterisieren.
• CD19 ist ein Glykoprotein, das auf allen peripheren B-Lymphozyten sowie auf allen B-Zell-Vorläufern vorhanden ist. Es ist auf Plasmazellen nicht vorhanden. Dies ist der früheste Marker für B-Zellen und spielt eine wichtige Rolle bei der Regulierung der Aktivierung und Proliferation von B-Lymphozyten. CD19 wird auf allen neoplastischen Zellen von akuter Leukämie mit B-Zell-Ursprung exprimiert und ist auch in einigen Formen von akuter Monoblasten-Leukämie vorhanden.
• CD20 ist ein nicht-glykosyliertes Protein. Bei der Ontogenese von B-Lymphozyten erscheint das CD20-Antigen nach CD19 im Stadium der Prä-B-Zell-Differenzierung von Lymphozyten. Es fehlt auf der Plasmamembran von Plasmazellen. Es wird in ALL, B-Zellen chronischer lymphatischer Leukämie, Haarzellenleukämie, Burkitt-Lymphom und sehr selten in akuter Monoblastenleukämie exprimiert.
• CD21 ist ein Glykoprotein, in einer signifikanten Menge ist es auf B-Lymphozyten in lymphoiden Organen und in einer kleinen Menge auf B-Zellen von peripherem Blut vorhanden. CD21 ist ein Rezeptor für das Epstein-Barr-Virus.
• CD22 ist ein Protein, das aus zwei Polypeptidketten besteht. Es wird auf der Membran der meisten B-Lymphozyten einschließlich Vorläuferzellen (Prolymphozyten) exprimiert. Das Antigen wird nach ihrer Aktivierung nicht auf B-Lymphozyten (Plasmazellen) exprimiert. Die am stärksten ausgeprägte Expression von CD22 wird an Zellen mit Haarzellleukämie, schwach - an myeloischen Leukämien und nicht-T-Zell-ALL nachgewiesen.
• CD23 ist ein Glycoprotein, das durch aktivierte B-Lymphozyten von peripherem Blut in einem viel größeren Ausmaß exprimiert wird. CD23 vermittelt IgE-abhängige Zytotoxizität und Phagozytose durch Makrophagen und Eosinophile.
• CD25 ist ein einzelkettiges Glycoprotein, das als ein Rezeptor mit niedriger Affinität für IL-2 identifiziert wurde. Dieser Rezeptor wird auf aktivierten T-Lymphozyten und in geringerer Dichte auf aktivierten B-Zellen exprimiert. Im peripheren Blut gesunder Menschen ist das Antigen in mehr als 5% der Lymphoidzellen vorhanden.
• CD29 ist ein Fibronectin-Rezeptor. Es ist in den Texturen weit verbreitet, es wird von den Leukozyten geäußert. Der CD29-Nachweis an peripheren Blutzellen wird verwendet, um eine Subpopulation von T-Zellen mit dem CD4 + CD29 + -Phänotyp, die Typ-2-Helfer (Th2) genannt werden, zu typisieren. Diese Zellen nehmen durch die Produktion von Lymphokinen an der Realisierung der humoralen Immunantwort teil.
• CD33 ist ein Transmembran-Glycoprotein. Es ist auf der Oberfläche von Zellen der myeloiden und monozytischen Reihe vorhanden. Es findet sich auf der Oberfläche von Monozyten und in geringerem Maße von Granulozyten aus peripherem Blut. Etwa 30% der roten Knochenmarkszellen exprimieren CD33, einschließlich Myeloblasten, Promyelozyten und Myelozyten. An Membranen von pluripotenten Stammzellen fehlt Antigen. CD33 wird verwendet, um Zellen in myeloischen Leukämien zu charakterisieren. Leukämiezellen lymphoiden und erythroiden Ursprungs exprimieren CD33 nicht.
• CD34 ist ein Phosphoglycoprotein, das von hämatopoetischen Vorläuferzellen, einschließlich monopotenten Stammzellen, exprimiert wird. Die ausgeprägteste Expression von Ar wird in frühen Vorläufern beobachtet; wenn die Zellen reifen, fällt die Expression des Markers. CD34 wird auch auf Endothelzellen gefunden. CD34 wird zur Charakterisierung von Zellen bei akuter myeloischer und lymphoblastischer Leukämie verwendet. Bei chronischer lymphatischer Leukämie und Lymphomen wird CD34-Antigen-Expression nicht nachgewiesen.

• CD41a wird durch Plättchen und Megakaryozyten exprimiert. Monoklonale Antikörper für den CD41a-Nachweis werden zur Diagnose von Megakaryoblasten-Leukämie verwendet. Bei Glązmann-Thrombasthenie ist die Expression dieses Antigens nicht vorhanden oder signifikant unterdrückt.
• CD42b ist ein Membranglycoprotein, das aus zwei Polypeptidketten besteht. Der Marker befindet sich auf der Oberfläche von Thrombozyten und Megakaryozyten. In der klinischen Praxis wird der Nachweis von CD42b verwendet, um die Thrombozytopathie zu diagnostizieren - Bernard-Soulier-Syndrom.
• CD45RA gehört zur Klasse der Transmembran-Glykoproteine. Dies ist ein übliches Leukozyten-Antigen. Es wird auf der Zellmembran von B-Lymphozyten, in einem geringeren Ausmaß T-Lymphozyten und auf reifen medullären Thymozyten exprimiert. Der Marker wird nicht von Granulozyten exprimiert.
• CD45RO ist eine Isoform mit niedrigem Molekulargewicht von CD45RA, einem gewöhnlichen Leukozyten-Ag. Sie finden sich auf T-Zellen (Gedächtnis-T-Lymphozyten), Subpopulationen von B-Lymphozyten, Monozyten und Makrophagen. Monoklonale Antikörper gegen CD45RO interagieren mit den meisten Thymozyten, einer Subpopulation ruhender CD4 + - und CD8 + -T-Lymphozyten und reifen aktivierten T-Zellen. Myelomonozytische Zellen, Granulozyten und Monozyten tragen ebenfalls dieses Antigen. Es wird in zentroblastischen und immunoblastischen Lymphomen nachgewiesen.
• CD46 - O-glykosyliertes Dimer. Es ist in Geweben weit verbreitet und wird durch T- und B-Lymphozyten, Monozyten, Granulozyten, NK-Zellen, Blutplättchen, Endothelzellen, Fibroblasten, aber nicht auf der Oberfläche von roten Blutkörperchen exprimiert. CD46 bietet Gewebeschutz vor Komplementwirkung.
• CD61 ist ein Plättchen-Antigen. Es wird auf Blutplättchen von peripherem Blut und rotem Knochenmark sowie auf Megakaryozyten und Megakaryoblasten exprimiert. Seine Definition wird als Marker für akute Megakaryoblastenleukämie verwendet. Die Expression von Antigen ist bei Patienten mit Glanzmann-Thrombastenie nicht vorhanden oder unterdrückt.
• CD95, auch Fas oder APO-1 genannt, ist ein Transmembran-Glykoprotein, ein Mitglied der Familie der Rezeptoren des Tumornekrosefaktors. Es wird in signifikanten Mengen auf peripheren Blut-T-Lymphozyten (CD4 + und CD8 +) und in geringerem Ausmaß auf B-Lymphozyten und NK-Zellen exprimiert. Dieses Antigen wird auch auf Granulozyten, Monozyten, Gewebezellen und neoplastischen Zellen exprimiert. Die Bindung von CD95 an den Fas-Liganden (CD95L) induziert Apoptose in den Zellen.
• CD95L oder Fas-Ligand, ein Membranprotein, das zur Familie der Rezeptoren des Tumornekrosefaktors gehört. Dieses Antigen wird von zytotoxischen T-Lymphozyten, NK-Zellen und sehr oft von Tumorzellen exprimiert; der Hauptinduzierer der Apoptose in Zellen.
• HLA-DR ist eine monomorphe Determinante von Klasse-II-Molekülen des menschlichen Haupthistokompatibilitätskomplexes (HLA). Der Marker wird auf Langerhans-Zellen, dendritischen Zellen lymphoider Organe, bestimmter Arten von Makrophagen, B-Lymphozyten, aktivierten T-Zellen und Epithelzellen des Thymus exprimiert. Der Test für diesen Marker wird verwendet, um aktivierte T-Lymphozyten mit dem Phänotyp CD3 + HLA-DR + zu quantifizieren.

Unter Verwendung einer anderen Auswahl von monoklonalen Antikörpern gegen Marker ist es möglich, ein phänotypisches Porträt von Zellen herzustellen, die für eine gegebene Form von Leukämie charakteristisch sind.

Neben der Verwendung von Immunophänotypisierung Techniken für die Diagnose und Differentialdiagnose von hämatologischen Malignitäten, besonders wichtig geworden, ihre Verwendung bei der Behandlung Prozess den Zustand der Vergebung und Restpopulation von leukämischen Zellen zu beurteilen. Die Kenntnis der phänotypischen „Portrait“ von Blasten in der Zeit der Diagnose, zu diesen Markern es Zelle leukämischen Klon in Remission finden, und von der Zunahme ihrer Zahl - die Entwicklung eines Rezidivs lang (für 1-4 Monate), bis seine klinische und morphologische Merkmale vorherzusagen.

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