Hepatitis-A-Virus

Virale Hepatitis A ist eine menschliche Infektionskrankheit, die durch eine vorherrschende Leberschädigung gekennzeichnet ist und klinisch eine Intoxikation und Gelbsucht zeigt. Das Hepatitis-A-Virus wurde 1973 von S. Feinstone (und anderen) mit der Methode der Immunelektronenmikroskopie und der Infektion von Affen - Schimpansen und Krallenaffen - nachgewiesen. Die Essenz der Methode der Immunelektronenmikroskopie besteht darin, dass spezifische Antikörper (Serum von Rekonvaleszenten) zu dem Filtrat der Fäkalien des Patienten mit Hepatitis A hinzugefügt werden und das Präzipitat einer Elektronenmikroskopie unterzogen wird. Aufgrund der Interaktion von Viren mit spezifischen Antikörpern unterliegen sie einer spezifischen Aggregation. In diesem Fall sind sie leichter nachzuweisen, und die Aggregation unter dem Einfluss von Antikörpern bestätigt die Spezifität des Pathogens. Die Entdeckung von S. Feinstone wurde in Experimenten an Freiwilligen bestätigt.

Das Hepatitis-A-Virus hat eine sphärische Form, der Durchmesser des Virions beträgt 27 nm. Das Genom wird durch eine einzelsträngige positive RNA mit einer Masse von 2,6 MD dargestellt. Supercapsid fehlt. Der Symmetrietyp ist kubisch - ikosaeder. Das Kapsid hat 32 Kapsomere, es wird von vier Polypeptiden (VP1-VP4) gebildet. Aufgrund seiner Eigenschaften gehört das Hepatitis-A-Virus zur Gattung Heparnovirus, der Familie der Picornaviridae. Antigen, Hepatitis-A-Virus (HAV - Hepatitis-A-Virus) ist homogen. HAV vermehrt sich gut im Körper von Schimpansen, Pavianen, Hamadryls und Glücksäffchen (Marmosets). Lange Zeit konnte sich das Virus nicht kultivieren. Nur in den 1980er Jahren. Es war möglich, Zellkulturen zu erhalten, in denen sich HAV ausbreitet. Für diese Zwecke wurden zunächst transplantierte Nierenlinien der Rhesusaffenniere (Kultur FRhK-4) und jetzt - die transplantierte Linie von Nierenzellen grüner Affen (Kultur 4647) verwendet.

Nach den Empfehlungen von WHO-Experten wurde die folgende Nomenklatur der Marker des Hepatitis-A-Virus angenommen: Hepatitis-A-Virus-NAU-Antikörper gegen Hepatitis-A-Virus: Anti-NAV-IgM und Anti-NAV-IgG.

HAV sind kleine Teilchen mit einem Durchmesser von 27-30 nm, die eine ikosaedrische Symmetrie aufweisen und Homogenität besitzen. Auf dem durch das Verfahren der Immunaggregation erhaltenen Elektronenbeugungsmuster werden elektronendichte Teilchen mit oberflächlich angeordneten symmetrisch angeordneten Kapsomeren nachgewiesen. Bei negativem Kontrast werden sowohl vollständige als auch leere Partikel in den Präparaten nachgewiesen. Im Gegensatz zur Influenza weist Nucleocapsid NAV keine Oberflächenvorsprünge und -membranen auf. Es ist auch wichtig, dass das Virion-HAV keine herzförmige Struktur aufweist.

Nach seiner physikalisch-chemischen Eigenschaften von Hepatitis-A-Virus zur Familie der Picornaviridae bezogen, Genus Enterovirus mit der Ordnungszahl 72. Allerdings ist diese Taxonomie war zu ungewöhnlich, und WHO fand es möglich, die Terminologie „Hepatitis-A-Virus“ zu verlassen.

Wie alle Viren der Familie Picornaviridae enthält das Hepatitis-A-Virus Ribonukleinsäure. Einige Labors haben die Möglichkeit aufgezeigt, das Genom des Hepatitis-A-Virus zu klonen, was die Aussicht auf Impfstoffpräparate eröffnet.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7],

Resistenz des Hepatitis-A-Virus

Das Virus ist relativ resistent gegen hohe Temperaturen, Säuren, Fettlösungsmittel (es gibt keine Lipide), Desinfektionsmittel, es toleriert einen niedrigen Temperatur gut. All dies trägt zu seiner langfristigen Erhaltung in der äußeren Umgebung bei. Bei Raumtemperatur überlebt es für mehrere Wochen, bei 60 ° C verliert es teilweise nach 4-12 Stunden vollständig - nach einigen Minuten bei 85 ° C. Sehr beständig gegen Chlor, wodurch es durch die Barrieren von Wasseraufbereitungsanlagen in das Leitungswasser eindringen kann.

Zusammenfassend können wir das Hepatitis-A-Virus folgendermaßen charakterisieren:

• der natürliche Meister ist der Mensch;
• Versuchstiere - Mamzozet, Schimpanse;
• Quelle der Infektion - Kot;
• Krankheit - epidemisch und endemisch;
• der Übertragungsweg ist fäkal-oral;
• Inkubationszeit - 14-40 Tage;
• Übergang zur chronischen Hepatitis - nicht angegeben.

Immunologische Eigenschaften des NAV sind wie folgt:

• Prototyp-Stämme - Ms-1, CR-326, GVG. Alle sind immunologisch ähnlich oder identisch;
• Antikörper - IgM und IgG, werden als Reaktion auf die Einführung von Strukturproteinen des Virus produziert und sind schützend;
• I Die trophische Wirkung von humanem Serum-y-Globulin - schützt oder dämpft die Krankheit unter der Bedingung der Verabreichung vor der Infektion oder während der Inkubationszeit.

Physikalisch-chemische Eigenschaften von NAU sind wie folgt:

• Morphologie ist ein nicht-schalenförmiges kugelförmiges Teilchen mit kubischer Symmetrie, das Kapsid besteht aus 32 Kapsomeren;
• Der Durchmesser beträgt 27-30 nm;
• Die Dichte in CsCl (g / cm³) beträgt 1,38-1,46 (offene Teilchen), 1,33-1,34 (reifes Virion), 1,29-1,31 (unreife Virionen, leere Teilchen);
• Der Sedimentationskoeffizient beträgt 156-160 reife Virionen;
• Nukleinsäure - einzelsträngige, lineare RNA;
• Relatives Molekulargewicht - 2,25 106-2,8 106KD;
• Die Anzahl der Nukleotide beträgt 6.500-8.100.

Die Stabilität von NAV in physikochemischen Effekten ist wie folgt:

• Chloroform, Ether - ist stabil;
• Chlor, 0,5-1,5 mg / l, 5 ° C, 15 min - teilweise Inaktivierung;
• Chloramin, 1 g / l, 20 ° C, 15 min - vollständige Inaktivierung;
• Formalin, 1: 4000, 35-37 ° C, 72 Stunden - vollständige Inaktivierung, 1: 350, 20 ° C, 60 min - teilweise Inaktivierung.

Temperatur:

• 20-70 ° C - stabil;
• 56 ° С, 30 Minuten - es ist stabil;
• 60 ° C, 12 Stunden - teilweise Inaktivierung;
• 85 ° С, 1 min - vollständige Inaktivierung;
• Autoklavieren, 120 ° C 20 Minuten - vollständige Inaktivierung;
• Trockene Hitze, 180 ° C, 1 Stunde - vollständige Inaktivierung;
• UV, 1,1 W, 1 min - vollständige Inaktivierung.

Die vorgelegten Daten zeigen, dass die physikochemischen Eigenschaften des Hepatitis-A-Virus den Enteroviren am nächsten kommen. Wie andere Enteroviren ist HAV gegen viele Desinfektionslösungen resistent, bei 85 ° C für einige Minuten vollständig inaktiviert und autoklaviert.

Es ist bewiesen, dass das Hepatitis-A-Virus in primären und Transplantat-Monoschichtkulturlinien von menschlichen und Affenzellen reproduziert werden kann. Eine besonders aktive Reproduktion des Hepatitis-A-Virus in Kulturen in vitro wird beobachtet, wenn Leberextrakte von Affenpatienten als Ausgangsmaterial verwendet werden. Es sollte jedoch beachtet werden, dass bei allen Versuchen nach einer Reproduktion von Hepatitis-A-Virus in In-vitro-Kulturen bemerkenswert lange Inkubationszeit in primären Durchlässe (-10 bis 4 Wochen), anschließend Akkumulation von viralem genetischem Material erhöht, aber die absoluten Werte sind sehr unbedeutend, was vielen Forschern Anlass gibt, über unvollständige Replikation des Hepatitis-A-Virus in Gewebekulturen zu sprechen.

Wenn man die Literaturdaten über die Reproduktion von Hepatitis-A-Virus in nicht-keilförmigen Kulturen zusammenfasst, kann man sagen, dass die Tatsache einer längeren Erfahrung von HAV in vitro außer Zweifel steht. Optimale Bedingungen für ein stabiles hohes Niveau der Virusreplikation wurden noch nicht endgültig identifiziert, und dies beschränkt die Untersuchung seiner biologischen Eigenschaften, die Herstellung einer Quelle von Reagenzien für die Herstellung von Diagnostika und das Design von Impfstoffen.

Gleichzeitig finden sich in der Literatur optimistischere Urteile zu diesem Problem. Die Lösung aller Probleme im Zusammenhang mit der Kultivierung des Hepatitis-A-Virus ist eine Frage für die nahe Zukunft. Wenn die optimalen Bedingungen zu studieren HAV Vermehrung in der Zellkultur Affen embryonale Nierenrhesus zwei Phasen aufgedeckt: die Phase der infektiösen Virusproduktion (bis zu 6-8 Tagen auf dem 5. Durchgang) und die Phase der intensiven Akkumulation von viralem Antigen. Es wird auch gezeigt, dass die signifikanteste Akkumulation des viralen Antigens unter den Bedingungen der sogenannten Walzenkultivierung (rotierende Flaschen) auftritt. Dieser Weg eröffnet große Möglichkeiten, ein kulturelles Antigen in großen Mengen zu erhalten, und folglich wird ein Ausgangsmaterial für die Herstellung von Diagnosesystemen und die Herstellung von Impfstoffpräparaten erscheinen.

Epidemiologie der Hepatitis A

Hepatitis-A-Virus hat eine hohe Pathogenität für den Menschen. Nach der Schlussfolgerung der WHO (1987) reicht es für den Ausbruch der Krankheit aus, nur ein Virion zu infizieren. Die praktische Infektionsdosis ist jedoch wahrscheinlich viel höher. Die Infektionsquelle ist nur eine infizierte Person. Das Virus wird in großen Mengen mit Kot 12 bis 14 Tage vor dem Auftreten von Gelbsucht und innerhalb von 3 Wochen freigesetzt. Ikterische Periode. Signifikante Unterschiede in der Isolierung des Erregers bei Patienten mit ikterischen, ikterischen und asymptomatischen Formen der Hepatitis A wurden nicht festgestellt. Die Infektionsmethode ist fäkal-oral, hauptsächlich wässrig, und auch nach Haushalten und Nahrungsmitteln. Die Infektionsmethode ist fäkal-oral, hauptsächlich wässrig, und auch nach Haushalten und Nahrungsmitteln. Der hauptsächliche (primäre) Übertragungsweg des Virus ist Wasser. Es ist auch möglich, Infektionen in der Luft zu übertragen. Die Anfälligkeit der Bevölkerung ist universell. Meist sind Kinder unter 14 Jahren krank. Die Krankheit hat eine ausgeprägte Herbst-Winter-Saisonalität.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

Symptome der Hepatitis A

Die Inkubationszeit variiert von 15 bis 50 Tagen, was von der Menge der infizierenden Dosis des Virus abhängt, aber durchschnittlich 28-30 Tage beträgt. Einmal im Körper, Hepatitis-A-Virus repliziert in den regionalen Lymphknoten, in das Blut und dann an den Leberzellen und verursacht diffuse akute Hepatitis, die durch Läsionen der Leber Hepatozyten und retikuloendothelialen Zellen und eine Abnahme seiner Entgiftung und Barrierefunktionen begleitet. Schäden an Hepatozyten treten nicht aufgrund der direkten Wirkung des Virus, sondern als Folge immunopathologischer Mechanismen auf. Das typischste Bild der Hepatitis A ist die akut-ikterische Zyklizität: Inkubationszeit, Prodromal (prä-ikterisch), Ikteruszeit und Rekonvaleszenz. Jedoch offenbart in den Brennpunkten der Infektion eine große Anzahl von Patienten mit asymptomatischer und anikterisch Formen der Infektion, deren Anzahl über icteric vorherrscht ( „Eisberg Phänomen“).

Die post-infektiöse Immunität ist stark und langanhaltend, verursacht durch virusneutralisierende Antikörper und Immunspeicherzellen.

Mikrobiologische Diagnose von Hepatitis A

Die Diagnose der Hepatitis A (außer Infektion Tiere - Schimpansen marmozet, Paviane, die wir haben) auf verschiedene immunologische Verfahren zugrunde: DGC Immunofluoreszenz Methode, Hämagglutination Immun Adhäsion (Komplex von viralen Antigen + Antikörper in Gegenwart von Komplement auf Erythrozyten adsorbiert und bewirkt , dass ihre Haftung) . Die Anwendbarkeit dieser Verfahren jedoch begrenzt ist aufgrund des Fehlens von spezifischen viralen Antigenen und Immunreaktion erfordert Leberbiopsien, was unerwünscht ist. Zuverlässig und spezifisch ist die Methode der Immunelektronenmikroskopie, aber sie ist sehr mühsam. Daher , bis die einzige annehmbare Methode zur immunologischen Reaktion ist feste Phase in Form von IPM immunosorbent Assay oder RIM, insbesondere in der Modifikation des „capture“ von Immunglobulin M. In unserem Land zu diesem Zweck Testsystem vorgeschlagen - „DIAG-A-GEO“. Das Arbeitsprinzip dieses Testsystems ist wie folgt. An den Wänden des Polystyrols lunochek ersten Antikörper gegen Immunglobuline der Klasse M (antiimmunoglobuliny M) sorbiert wird dann auf dem untersuchten Patientenserum zugegeben. Wenn es Antikörper - Klasse IgM ist, sie an einen Antikörper-Ti-M binden werden, dann zu einem bestimmten Virusantigen (Hepatitis A - Virus), die durch Aufwachsen in der Zellkultur gewonnen wird. Das System wird gewaschen und mit Meerrettichperoxidase markierte antivirale Antikörper werden hinzugefügt. Wenn alle vier Komponenten des Systems interagieren, entsteht ein vierschichtiges "Sandwich":

• Antiimmunglobuline M,
• Immunglobuline M (gegen Hepatitis-A-Virus - im Testserum des Patienten),
• virales Antigen,
• antivirale Antikörper, die mit einem Enzym markiert sind.

Um diesen Komplex nachzuweisen, wird ein Substrat für das Enzym zu den Lünetten hinzugefügt. Unter dem Einfluss des Enzyms wird es zerstört und ein farbiges Produkt entsteht. Die Intensität der Farbe kann quantitativ mit einem Spektrophotometer oder Photocolorimeter gemessen werden.

Der Vorteil der Methode des "Einfangens" von IgM ist, dass Antikörper dieser Klasse von Immunglobulinen bei der primären Immunantwort erscheinen und ein aktives Stadium der Infektion anzeigen, sie verschwinden nach der übertragenen Krankheit. Antivirale Antikörper, die zu der Klasse von IgG gehören, bleiben im Gegensatz dazu für lange Zeit nach der Krankheit bestehen und liefern die erworbene Immunität. Für den Nachweis von Hepatitis-A-Viren wurde eine DNA-Sonden-Methode vorgeschlagen: Eine komplementäre vRNA wird als DNA-Sonde verwendet.

Behandlung von Hepatitis A

Aufgrund der Tatsache, dass die Interferonproduktion bei viraler Hepatitis gestört ist, basiert die Behandlung von Hepatitis A auf der Verwendung von Interferon und Induktor seiner endogenen Syntheseamixin.

Spezifische Prävention von Hepatitis A

Früher weit verbreitet seroprevention Hepatitis wurde A mit Gammaglobulin jedoch nicht gerechtfertigt, wurde der Schwerpunkt auf die Halte Immunisierung gelegt, trug eine Impfung gegen Hepatitis A. Zu diesem Zweck werden verschiedene Varianten von Impfstoffen entwickelt und werden bereits verwendet. In Russland wurde bereits 1995 ein wirksamer Impfstoff gegen Hepatitis A gewonnen und jetzt erfolgreich angewendet.