Diagnose von Herpes

Die Diagnose von Herpes ist in empfindlichen Zellkulturen, Immunofluoreszenz und serologische Methoden zur Durchführung der klassischen Virusausscheidung basiert, kolposkopische Studien mit modernen molekularbiologischen Methoden (PCR, Dot-Hybridisierung) durchgeführt wird, mit dem Sie alle Herpes-Virus-Gruppe, einschließlich der HHV-6 und HHV-7 zu diagnostizieren erlaubt Arten.

Methoden der Labordiagnostik der Herpesinfektion

Die wichtigsten Methoden zielen auf die Sekretion von HSV oder den Nachweis viraler Partikel und / oder ihrer Komponenten ab	Hilfsverfahren zum Nachweis von Antikörpern gegen HSV in biologischen Flüssigkeiten des menschlichen Körpers
Isolierung von HSV in empfindlichen Kulturen von Zellen und Tieren Direkte und Immunelektronenmikroskopie Direkte und indirekte MFA-Optionen IFA Molekularbiologische Methoden Latex-Agglutinationsreaktion	Neutralisationsreaktion RSK Bestimmung von Antikörpern gegen nicht-strukturelle Proteine von HSV-1,2

Es wird gezeigt, dass 76% der Patienten Genitalherpes (GH), verursacht durch HSV-2, und in 24% - HSV-1-Typ haben. Und GG als Monoinfektion trat nur bei 22% der Patienten auf, in 78% der Fälle traten mikrobielle Assoziationen auf. Bei 46% der Patienten wurde eine Parasitocenose durch zwei Erreger festgestellt, darunter Chlamydien in 40% der Fälle. Weniger häufig in den Abstrichen bestimmt Gardnerell, Trichomonas, Gonokokken.

Bei 27% der Patienten wurde die Parasitocenose durch drei und 5,2% durch vier Pathogene dargestellt. Und häufiger gab es eine Kombination von Chlamydien mit Gardnerella und Candida-Pilzen. Diese Daten rechtfertigen die Notwendigkeit eine gründliche bakteriologische Untersuchung von Patienten YY die pathogenen Mittelkombinationen, sowie eine eingehende Untersuchung der Pathogenese von Mischinfektionen des Urogenitaltraktes zu identifizieren, die für eine differenzierte komplexe Therapie von HSV-Infektion ermöglichen würden.

Zu untersuchende Materialien bei der Isolierung von HSV in Abhängigkeit von der Lokalisierung von herpetischen Läsionen

Lokalisierung von Läsionen	Inhalt der Vesikel	Zellkratzen				DEZA	Absaugen von den Bronchien	Bioptat	Blut
		1	2	3	4
Leder	+								+
Augen			+						+
Genitalien				+					+
Anus	+				+				+
Mund	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Leichtgewicht		+					+		+
Die Leber								+	+
Angeborene Herpes	+	+	+				+		+

Methoden der Labordiagnostik der Cytomegalovirus-Infektion

Methoden	Zeit, die benötigt wird, um Ergebnisse zu erzielen	Notizen
VIRUSOLOGISCH
Elektronenmikroskopie	3 Stunden	Stampfen
Isolierung des Virus in Zellkultur (CPD)	4-20 Tage	Standard, langsam
Immunfluoreszenzfärbung von frühen AH mit monoklonalen Antikörpern	6 Stunden	Weniger spezifisch
Zytologisch	2-3 Stunden	Weniger spezifisch
SEOLOGISCH
RSK	2 Tage	Standart
Ssubsistence	1 Tag	Mühsam
REEF	6 Stunden	Einfach, spezifisch
NFIF	6 Stunden	Kompliziert
RIMF	6 Stunden	Kompliziert
IFA (IgM, TO)	6 Stunden	Schnell, einfach
Immunoblot	6 Stunden	Teuer
MOLEKULAR-BIOLOGISCH
MG	5-7 Tage	Kostspielig, zeitaufwendig
PCR	3 Stunden	Teuer

Methoden zur Diagnose des Herpes-Zoster-Virus

Diagnostische Methoden	Labormethoden
INDIREKT
Zuordnung	Gewebekultur, Hühnerembryonen, Labortiere, Co-Kultivierung mit permissiven Zellen oder Helferviren
Identifizierung von Isolaten	Neutralisationsreaktion, DSC, IF, IPPE, Reaktion von Präzipitatisolaten, Agglutination, IF
DIREKT
Zytologie	Abstriche: Farbimmunfluoreszenz
Histologie	Pathomorphologie der Zelle
Struktur	Embryonale Mikroskopie, Immunelektronische Mikroskopie
Bestimmung von Antigenen	IF, PIÉF, RIM, IFA
Bestimmung der lokalen Produktion von Antikörpern	IgM, IgG, IgA: IFA, RIA
Molekularbiologische Ansätze	Molekulare Hybridisierung, PCR

Labordiagnose der durch das Herpes-Zoster-Virus verursachten Infektion

Diagnostische Probleme	Methoden	Erwartete Ergebnisse
Akute Primärinfektion	1	Erkennung nach 2 Stunden
	2	Die Menge an Antikörpern wächst langsam
	3	Vorhanden 3 Tage nach der Infektion
Akute reaktivierte Infektion	1	Nachweis von ULV in 2 Stunden
	2	Die Menge an Antikörpern wächst langsam
	4	Vorhanden 4 Tage nach dem Auftreten von Hautausschlägen

1. die Bestimmung in der Flüssigkeit von Bläschen von WIEF;
2. Serologie: DSC, ELISA, zur Identifizierung
3. Serologie: ELISA zum Nachweis von IgM;
4. Serologie: ELISA, zum Nachweis von IgA, IgM.

Methoden zur Anzeige der Immunantwort einer Infektion aufgrund des Herpes-Zoster-Virus

Annäherung	Methode
Nachweis eines erhöhten Antikörpertiters in den zweiten Seren	RSK, RTGA, RPGA, Neutralisationsreaktion IF, RIM, ELISA
Nachweis von IgG, IgA Klasse-spezifischen Antikörpern in der ersten Serumprobe	IFA, IF, RIM, Latexagglutination

Interpretation der Ergebnisse der serologischen Untersuchung von Patientenseren auf Herpesvirus-Infektionen (ELISA)

Name der Infektion / Markierung	Durchschnittliche Schwellenwerte für Infektionen
	Analyseergebnisse	Interpretation
Cytomegalie Anti-CMV IgG (1-20 E / ml) Anti-CMV IgM (100-300%)	Positiv 1-6 Positiv 6-10 Positiv> 10 Negativ Positiv 100-300 Negativ <90 Zweifelhaft 90-100	Remission Erschwernis der Krankheit Akute Phase der Erkrankung Keine Infektion (Krankheit) Akute Phase der Erkrankung Wiederholen Sie die Analyse nach 2-3 Wochen
Herpes einfache 1,2 Serotypen Anti-HSV 1/2 insgesamt. (100-900%)	Positiv 100-400 Positiv 400-800 Positiv> 800 Negativ <100	Remission Erschwernis der Krankheit Akute Phase der Krankheit Keine Infektion (Krankheit)

Die Tabelle stellt die wichtigsten Methoden der Labordiagnostik von Herpesvirusinfektionen vor und empfiehlt auch biologische Materialien, die bei der Isolierung von HSV unter Berücksichtigung der Lokalisation von herpetischen Läsionen untersucht werden

Zuverlässig ist die Zuordnung von Herpes Simplex und CMV durch die Infektion von empfindlichen Zellkulturen. So wurde in einer virologischen Untersuchung von 26 Patienten in der Rezidivperiode HSV in 23 Fällen (88,4%) auf einer empfindlichen Vero-Zellkultur isoliert. In infizierten Kulturen wurde ein charakteristisches Muster der zytopathischen Wirkung von HSV beobachtet - die Bildung von mehrkernigen Riesenzellen oder die Ansammlung von gerundeten und vergrößerten Zellen in Form von Bündeln. In 52,1% der Fälle konnten 16 bis 24 Stunden nach der Infektion Herde des zytopathischen Effekts des Virus nachgewiesen werden. Nach 48-72 Stunden Inkubation der infizierten Kulturen erhöhte sich der Prozentsatz der Materialien, die eine spezifische Zellzerstörung verursachten, auf 87%. Und nur in 13% der Fälle wurden 96 Stunden nach der Infektion und mehr oder bei wiederholter Passage positive Ergebnisse festgestellt.

Methoden der Labordiagnostik der generalisierten Herpesinfektion

Die wichtigsten Methoden zielen auf den Nachweis (Isolation) von Herpesviren, ihrer Partikel und ihrer Komponenten ab	Hilfsverfahren zum Nachweis von Antikörpern gegen Herpesviren in biologischen Flüssigkeiten, zum Nachweis enzymatischer Verschiebungen im Blutserum
Isolierung von Herpes Virus auf empfänglichen Zellkulturen und Tier Direkte und immune Elektronenmikroskopie Direkte und indirekte Immunperoxidase - Verfahrens - Ausführungsformen Direkte und indirekte Fluoreszenzantikörpertechnik Optionen Optionen ELISA Ausführungsformen der molekularen (DNA-DNA) zu hybridisieren , Polymerase Chain Reaction Reaction Latexagglutination	Neutralisierungsreaktion Komplementfixierung Reaktions Latexagglutination indirekte Fluoreszenz - Antikörper - Methode Ausführungsform Indirect Immunperoxidase Verfahrensvariante Ausführungsform ELISA Methode immunes Blotting radiale Fixierung von Komplement - Methode Bestimmung der Alanin und Aspartat Ebenen

Serologische Methoden werden verwendet, um infektiöse Mononukleose (Infektion durch VEB) zu diagnostizieren. Die Reaktion von Paul Bunnel mit Erythrozyten eines Widders, eine diagnostische Titer von 1:28 und höher mit einer einzigen Studie von Serum oder eine 4-fache Erhöhung der Antikörper bei der Untersuchung von paarigen Seren. Verwenden Sie die Goff-Bauer-Reaktion mit einer Suspension von 4% formalisierten roten Blutkörperchen des Pferdes. Das Ergebnis wird nach 2 Minuten berücksichtigt, bei infektiöser Mononukleose ist die Reaktion hochspezifisch.

Gegenwärtig wird ein Enzymimmunoassay (ELISA) zur Diagnose von infektiöser Mononukleose entwickelt. In diesem Fall werden IgG- und IgM-Antikörper im Serum des Patienten durch Inkubation mit EBV-infizierten Lymphoblasten bestimmt, gefolgt von einer Behandlung mit fluoreszierenden Antikörpern. In der akuten Phase der Erkrankung werden Antikörper gegen das virale Kapsidantigen in einem Titer von 1: 160 und darüber bestimmt.

Bei Verwendung eine Anzahl von eingeführten kommerziellen Testsystemen in IFA identifizieren: Antikörper gegen ant Egan EBV Umschlag Antikörper zu frühen Antigenen von EBV, der Gesamtantikörper zu einem frühen Antigen von EBV, in der akuten Phase der Erkrankung bestimmt und im Kern und im Zytoplasma, und der begrenzten Antikörper EBV früh, in der akuten Phase der Erkrankung bestimmt und im Kern und im Zytoplasma von Zellen begrenzt Antikörper gegen EBV early antigen, in der Mitte der Krankheit bestimmt nur im Zytoplasma von Zellen und Antikörper gegen EBV Kernantigene. Die Verwendung dieser Testsysteme ermöglicht die differenzielle Diagnose einer Reihe von Krankheiten, die mit EBV assoziiert sind.

Nachdem positiver ELISA um die Antikörper zu identifizieren EBV Immunoblot bestätigt Antwort geben, die das Vorhandensein von Antikörpern nachzuweisen EBV Markerproteine (p-Proteine) zu trennen: P23, P54, P72 (die Anwesenheit des Proteins deutet auf die Möglichkeit der Reproduktion EBV), S. 138. Said Über Labormethoden wird die Wirksamkeit der Behandlung kontrolliert.

Die Empfindlichkeit der virologischen Methoden liegt bei 85-100%, die Spezifität beträgt 100%, die Studienzeit beträgt 2-5 Tage. In der Praxis wird häufig die Methode der direkten Immunfluoreszenz (PIF) mit polyklonalen oder monoklonalen Antikörpern gegen HSV-1 und HSV-2 eingesetzt. Die UIF-Methode kann leicht in einem herkömmlichen klinischen Labor reproduziert werden, es ist nicht teuer, die Sensitivität liegt über 80%, die Spezifität beträgt 90-95%. Durch Immunfluoreszenzmikroskopie die Anwesenheit von Zytoplasmaeinschlüsse ergab, morphologische Merkmale, der Prozentsatz der infizierten Zellen in den Abstrichen, schabt die Harnröhre, den Gebärmutterhalskanal, Gebärmutterhals, Enddarm.

Die UIF-Methode gibt eine Vorstellung von den morphologischen Eigenschaften von Zellen und Veränderungen in der Lokalisierung von HSV-Antigenen. Neben direkten Anzeichen einer Zellschädigung durch Herpesviren (Nachweis spezifischer Lumineszenz) gibt es nach den UIF-Daten indirekte Anzeichen einer herpetischen Infektion:

• Aggregation von Kernmaterie, Exfoliation von Karyoolma;
• Anwesenheit der so genannten. Kerne "Löcher", wenn nur ein Karyolemma vom Zellkern übrig bleibt;
• das Vorhandensein von intranukleären Einschlüssen - Caudrys Kalb.

Bei der Einrichtung des UIF erhält der Arzt nicht nur eine qualitative, sondern auch eine quantitative Beurteilung des Zustandes der infizierten Zellen, anhand derer wir die Wirksamkeit einer antiviralen Therapie mit Aciclovir (AC) beurteilen konnten. So wurden 80 Patienten mit einfachem Herpes genitalis (GG) mit der UIF-Methode in der Dynamik untersucht. Es wird gezeigt, dass, wenn vor der Behandlung mit Acyclovir in Ausstrichen 88% der Patienten, die einen hohen Prozentsatz an infizierten Zellen hatte (50-75% und mehr), nach einem Verlauf von Acyclovir in Ausstrichen 44% der Patienten mit gesunden in 31% der Fälle nachgewiesen Zellen einzelne infizierten Zellen gekennzeichnet sind, und 25% der Patienten hatten bis zu 10% der infizierten Zellen.

Der Inhalt infizierter Zellen in Abstrichen (PIF-Reaktion) von Patienten mit Herpes genitalis, behandelt mit Aciclovir

Krankheitsperioden	Prozentsatz der Ausstriche
	Infizierte Zellen					Normale Zellen
	Mehr als 75%	50-75%	40-50%	10%	Einzelzellen in n / sp
Rückfall (vor der Behandlung)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remission (nach der Behandlung)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Mit vielen Jahren von Investmentfonds und das Verfahren der Dot-Hybridisierung beobachteten fast 100% der Übereinstimmung zwischen den Ergebnissen der Studie. Es soll beachtet werden, dass, um die Zuverlässigkeit der Diagnose von GH, insbesondere in den Fällen zu erhöhen, wo es subklinische und malomanifestnyh Formen von Herpes ist, wird empfohlen, die 2-3 Methode der Labordiagnostik zu verwenden, vor allem, wenn schwangere Frauen, Frauen mit geburts Geschichte benachteiligten Menschen mit nicht näher bezeichnen gynäkologische Diagnose zu untersuchen.

So, wenn die PCR-Diagnose von viralen bakteriellen Infektionen des Urogenitaltraktes, ist es notwendig, die positiven Ergebnisse unter Berücksichtigung der Anamnese, das Vorhandensein (oder Abwesenheit) von spezifischen klinischen Symptomen der Krankheit zu bewerten. Wenn Chlamydien mit PCR nachgewiesen werden, ist es in diesem Fall möglich, über eine Infektion zu sprechen und die Probleme der Therapie entsprechend zu lösen. Im Falle des Nachweises von Mycoplasmen (Ureaplasmen), die opportunistische Mikroorganismen sind, sind zusätzliche Kulturuntersuchungen erforderlich, um die Diagnose zu bestätigen, dh die Aussaat des Materials vom Patienten in empfindliche Zellkulturen. Nur wenn positive Ergebnisse in der Kulturanalyse erhalten werden, können wir über eine Laborbestätigung der Diagnose von Mykoplasmose sprechen. Mit der gleichen Methode kann, falls erforderlich, die Empfindlichkeit der isolierten Mykoplasmen gegenüber häufig verwendeten Arzneiformen (Antibiotika, Fluorchinolone usw.) bestimmt werden.

Vielleicht eine einstufige Infektion mit mehreren Viren der Familie Nepresviridae. Oft haben wir die Infektion eines Patienten mit HSV-1-, HSV-2- und CMV-Viren festgestellt. Viel häufiger mit mehreren Herpes-Viren infiziert waren Patienten mit klinischen und Labor-Manifestationen der sekundären IDS (Patienten mit onkohämatologischen, onkologischen, HIV-infizierten). Somit wird gezeigt, dass klinische und immunologische Störungen, die mit einer HIV-Infektion fortschreiten, von einer Zunahme der Anzahl von Herpesviren begleitet sind, die durch molekulare Hybridisierung nachgewiesen werden. In diesem prognostisch bedeutendsten Fall kann ein komplexer einstufiger Nachweis von DNA vom HSV-1-, CMV- und HHV-6-Typ betrachtet werden.

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