Polymerase-Kettenreaktion (PCR) bei der Diagnose von Infektionskrankheiten
Zuletzt überprüft: 23.04.2024
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PCR - eine der Methoden zur DNA-Diagnostik, die Anzahl der Kopien eines detektierbaren Teils des Genoms (DNA) von Bakterien oder Viren zu erhöhen, so dass eine Million Mal ist ein DNA-Polymerase-Enzym verwendet wird. Ein Test für dieses spezifische genomische Nukleinsäuresegment wiederholt multipliziert (verstärkt), die deren Identifizierung ermöglicht. Zunächst wird ein DNA-Molekül von Bakterien oder Viren durch Erhitzen in zwei Ketten geteilt, dann in Gegenwart der synthetisierten DNA-Primer (Sequenz von Nukleotiden, die spezifisch für den definierte genomisch) ist, sie mit komplementären Abschnitten der DNA-Bindung, synthetisierte, um den zweiten Strang der Nukleinsäure nach jedem Primer in Gegenwart einer thermostabilen DNA-Polymerase . Zwei DNA-Moleküle werden erhalten. Der Prozess wird viele Male wiederholt. Zur Diagnose genügt ein Molekül DNA, also ein Bakterium oder ein Viruspartikel. Umsetzen eines zusätzlichen Schritt - die DNA-Synthese auf dem RNA-Molekül unter Verwendung des Enzyms Reverse Transkriptase - hat RNA-Viren, wie HCV-Virus zu testen, erlaubt. Die PCR ist ein dreistufiger Prozess, der zyklisch wiederholt wird: Denaturierung, Primer-Annealing, DNA-Synthese (Polymerisation). Die synthetisierte Menge an DNA wird durch ELISA oder Elektrophorese identifiziert.
Serum oder Blutplasma, Abschaben der Harnröhre, Biopsie, Pleuraflüssigkeit, Zerebrospinalflüssigkeit usw. - PCR kann in verschiedenem biologischem Material verwendet werden, Die erste PCR wurde für die Diagnose von Infektionskrankheiten wie Hepatitis-B-Virus, virale Hepatitis C, Hepatitis-D-Virus-, CMV-Infektion, infektiöse sexuell übertragbaren Infektionen (Gonorrhoe, trash diynaya, Mycoplasma, Ureaplasma Infektion), Tuberkulose, HIV verwendet Infektion usw.
Der Vorteil der PCR bei der Diagnose von Infektionskrankheiten gegenüber anderen Methoden der Forschung ist wie folgt:
- der Erreger der Infektion kann in jeder biologischen Umgebung des Körpers gefunden werden, einschließlich des Materials, das durch Biopsie erhalten wird;
- Es ist möglich, Infektionskrankheiten in den frühesten Stadien der Krankheit zu diagnostizieren;
- Eine quantitative Auswertung der Forschungsergebnisse ist möglich (wie viele Viren oder Bakterien sind im Untersuchungsmaterial enthalten);
- hohe Empfindlichkeit der Methode; z.B. Empfindlichkeit der PCR für den Nachweis von DNA des Hepatitis - B - Virus im Blut 0.001 pg / ml (etwa 4 × 10 2 Kopien / ml), während die Empfindlichkeit eines DNA - Hybridisierungsverfahren verzweigten Sonden - 2,1 pg / ml (ca. 7 × 10 5 Kopien / ml).
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