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Southern Blotting
Zuletzt überprüft: 05.07.2025
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Southern Blotting (entwickelt von E. Southern und R. Davis 1975) ist die derzeit gängige Methode zur Identifizierung von Genen für eine bestimmte Krankheit. Dazu wird DNA aus den Zellen des Patienten extrahiert und mit einer oder mehreren Restriktionsendonukleasen behandelt. Die entstandenen Fragmente werden einer Elektrophorese unterzogen, wodurch sie nach Größe getrennt werden können (kleinere Fragmente wandern schneller durch die Poren des Gels). Anschließend werden die Fragmente auf einen Nitrozellulosefilter übertragen (nachgedruckt), auf den eine radioaktiv markierte Sonde aufgebracht wird. Die Sonde bindet nur an die komplementäre Sequenz. Anschließend wird mittels Autoradiographie die Position des gewünschten genomischen DNA-Fragments im Elektropherogramm bestimmt.
Die Hybridisierung von DNA- oder RNA-Präparaten, die tropfenweise ohne vorherige Restriktion und Elektrophorese auf eine feste Matrix aufgetragen werden, mit einer markierten DNA-Sonde wird, abhängig von der Konfiguration des DNA-Spots auf dem Filter (rund bzw. länglich), als Punkt- oder Schlitzhybridisierung bezeichnet.
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